由于高压蒸汽灭菌时，要使用温度高达120℃、两个大气压的过热蒸汽，操作时，必须严格按照操作规程操作，否则易发生意外事故。
高压灭菌锅是利用压力饱和蒸汽对产品做迅速而可靠的消毒灭菌设备，适用于医疗卫生事业、科研、农业等单位，对医疗器械、敷料、玻璃器皿、溶液培养基等做消毒灭菌，是理想的设备。高压蒸汽灭菌具有灭菌速度快、效果可靠、温度高、穿透力强等优点，不正确使用，可导致灭菌的失败。一般来说，高压灭菌锅的操作如下：
1、在使用前先检查下面排气瓶里的水位，要使其介于最高线和最低线的中间位置偏下，否则要将水倒出，再继续操作（注：此水壶是蒸汽冷凝后接冷凝水的，与锅内的水位无关）。
2、逆时针方向转开排气阀把手，然后横向向右滑开盖子。（如果是在操作的流程中打开要注意保证压强为0，温度不高于97℃，防止造成不必要的伤害）。
3、拿出上面的篮子，向里面加RO水/单蒸水，使水位线至少超过最下面篮子底部（如果里面有水，需检查水位，并保证水没有被污染，否则要将水排掉，重新换过）。
4、然后将要灭菌的东西放入篮子里，再慢慢的把篮子放入锅内，盖上盖子，顺时针旋紧排气阀。
6、按MODEL键选择你所需要的操作模型。（如有需要，选择你所需要的时间和温度）。
7、按START键，开始灭菌。(升温过程缓慢，不同的模式也不同，大约在30min左右)。
8、当设置的时间到的时候，仪器会连响三下，当温度降到97℃的时候，仪器要连响六下，当温度下降到60℃的时候 ，仪器要响十下，整个灭菌过程完成。（大概要一个小时左右）。
9、让高压灭菌锅的压强降到0，温度要降到80℃以下，然后按STOP 键，停止操作，此时已将自动转到制冷系统，然后关掉开关，切掉电源。
1、准备。将高压灭菌锅放在2000瓦电炉上，或放在有足够火力的煤气灶、煤炉上，向锅内加水至水位标记线为止。将准备灭菌的培养基及空玻璃器皿用牛皮纸包好，装入锅内套层中，物品放置不宜过多，过挤，锅内应留出三分之一空间。然后盖严锅盖，采用对角式均匀拧紧锅盖上的螺旋，关闭锅盖上的气阀。
2、加热。点燃热源，开始加热。当锅盖上的压力表达到0.5kg/c㎡时，打开放气阀，排净锅内冷空气，直到压力表回降到“0”时，关闭气阀，继续加热。当压力表上升到所需压力时（一般为1kg/c㎡），开始计算灭菌时间。此时应适当关小热源，不断调节热源大小，使压力从始至终维持在所需数值上，达到保压时间后，停止加热，使高压灭菌锅内压力自然下降。
3、结束。待压力表降至“0”时，拧松螺旋，半开锅盖，用锅内余热烘干盖纸，10分钟后取出灭菌物品。
1、锅外水壶水位线的检查，要使其介于最高线和最低线的中间位置偏下为宜。以免在灭菌过程中有过热的水和水蒸气溢出，造成危险。
8、在灭菌过程中，应注意排净锅内冷空气，锅内冷空气如排放不净，会影响灭菌效果，达不到彻底灭菌的目的。
9、由于高压蒸汽灭菌时，要使用温度高达120℃、两个大气压的过热蒸汽，操作时，必须严格按照操作规程操作，否则易发生意外事故。
